کیت اندازه‌گیری کمی MicroRNA

کیت‌های اندازه‌گیری کمی MicroRNA برای بررسی میزان بیان miRNAهای هدف در نمونه‌های زیستی استفاده می‌شوند. MicroRNAها مولکول‌های RNA کوتاهی هستند که در تنظیم بیان ژن نقش دارند و تغییر سطح آن‌ها در بسیاری از مطالعات مرتبط با سرطان، التهاب، بیماری‌های قلبی‌عروقی، اختلالات عصبی، پیری سلولی و تمایز سلول‌ها بررسی می‌شود.

محصولات این دسته بر پایه روش Real-Time PCR طراحی شده‌اند. در این روش، ابتدا RNA از نمونه استخراج می‌شود، سپس MicroRNA موردنظر طی مرحله رونویسی معکوس به cDNA تبدیل شده و در نهایت مقدار آن با استفاده از دستگاه Real-Time PCR اندازه‌گیری می‌شود.

بسته به نوع محصول، کیت ممکن است شامل معرف سنتز cDNA، مسترمیکس Real-Time PCR، پرایمر اختصاصی MicroRNA، کنترل داخلی یا مجموعه‌ای از این اجزا باشد.

کیت اندازه‌گیری MicroRNA چه کاربردی دارد؟

این کیت‌ها بیشتر در پروژه‌هایی استفاده می‌شوند که هدف آن‌ها بررسی تغییرات بیان یک یا چند miRNA مشخص است؛ برای مثال:

مقایسه بیان miRNA بین گروه کنترل و بیمار
بررسی اثر دارو یا تیمار روی سلول‌ها
مطالعه miRNAهای مرتبط با سرطان و متاستاز
بررسی miRNAهای موجود در سرم و پلاسما
مطالعات مربوط به التهاب و سیستم ایمنی
تحقیقات بیماری‌های قلبی و عصبی
بررسی تمایز، پیری سلولی و سلول‌های بنیادی
تأیید نتایج RNA sequencing یا Microarray با Real-Time PCR

این محصولات عمدتاً برای مصارف تحقیقاتی طراحی شده‌اند و استفاده از آن‌ها برای تشخیص بالینی نیازمند اعتبارسنجی و مجوزهای مربوطه است.

روش اندازه‌گیری MicroRNA با Real-Time PCR

اندازه کوتاه MicroRNAها باعث می‌شود نتوان آن‌ها را دقیقاً مانند ژن‌های معمولی اندازه‌گیری کرد. به همین دلیل، در کیت‌های مخصوص miRNA معمولاً از یکی از دو روش زیر برای ساخت cDNA استفاده می‌شود:

روش Stem-loop

در این روش برای هر miRNA یک پرایمر اختصاصی Stem-loop طراحی می‌شود. این روش برای اندازه‌گیری اختصاصی یک miRNA و تفکیک توالی‌های بسیار شبیه به هم مناسب است.

روش Poly(A) Tailing

در این روش ابتدا به انتهای MicroRNAها یک دنباله Poly(A) اضافه می‌شود و سپس cDNA ساخته می‌شود. این روش برای بررسی تعداد بیشتری miRNA و استفاده از یک ساختار عمومی‌تر در سنتز cDNA کاربرد دارد.

انتخاب بین این دو روش به نوع کیت، تعداد miRNAهای مورد بررسی و طراحی آزمایش بستگی دارد.

چه نمونه‌هایی قابل بررسی هستند؟

بسته به مشخصات هر کیت و روش استخراج RNA، می‌توان MicroRNA را در نمونه‌های مختلف اندازه‌گیری کرد، از جمله:

سلول‌های کشت‌شده
بافت تازه یا منجمد
سرم و پلاسما
خون کامل
نمونه‌های پارافینه FFPE
مایعات زیستی
اگزوزوم‌ها و وزیکول‌های خارج‌سلولی

همه کیت‌ها برای تمام نمونه‌ها مناسب نیستند؛ بنابراین قبل از خرید باید نوع نمونه و دستورالعمل محصول بررسی شود.

هنگام خرید کیت به چه نکاتی توجه کنیم؟

برای انتخاب کیت مناسب، فقط نام miRNA کافی نیست و بهتر است چند مورد دیگر نیز مشخص باشد:

نام دقیق miRNA هدف
نوع نمونه
روش استخراج RNA
روش ساخت cDNA
نوع آشکارسازی، SYBR Green یا Probe
تعداد واکنش‌های کیت
وجود کنترل داخلی یا Spike-in
سازگاری با دستگاه Real-Time PCR
نسبی یا مطلق بودن روش اندازه‌گیری
نیاز به خرید جداگانه پرایمر یا مسترمیکس

همچنین انتخاب ژن مرجع مناسب و کیفیت RNA نقش مهمی در دقت نتیجه نهایی دارد.

خرید کیت اندازه‌گیری کمی MicroRNA

در این دسته می‌توانید کیت‌ها و معرف‌های موردنیاز برای سنتز cDNA و اندازه‌گیری کمی MicroRNA به روش Real-Time PCR را بررسی کنید. این محصولات برای پروژه‌های دانشگاهی، پایان‌نامه‌ها، تحقیقات بیان ژن و مطالعات مرتبط با بیومارکرهای مولکولی مناسب هستند.

برای انتخاب محصول مناسب، بهتر است پیش از خرید نوع نمونه، نام miRNA هدف، تعداد نمونه‌ها و مدل دستگاه Real-Time PCR مشخص باشد. تیم ژنیران می‌تواند در انتخاب کیت، طراحی پرایمر اختصاصی، راه‌اندازی واکنش و بررسی نتایج به پژوهشگران کمک کند.

جمع‌بندی

کیت‌های اندازه‌گیری کمی MicroRNA ابزار مناسبی برای بررسی دقیق تغییرات بیان miRNAها هستند. انتخاب درست کیت، استفاده از RNA باکیفیت، طراحی مناسب کنترل‌ها و انتخاب روش صحیح سنتز cDNA باعث می‌شود نتایج قابل اعتمادتر و تکرارپذیرتری به دست آید.